Lentivirale vektorbasierte Perivellin-Injektion: Eine Methode zur Transduktion des interessierenden Gens in befruchtete einzellige Maus-Eizellen

Um die Transfektion durchzuführen, nehmen Sie eine spezielle Kammer mit frisch befruchteten Mauseiern, die in einem Tropfen des geeigneten Mediums suspendiert sind. In diesem Stadium enthält die Eizelle eine große zentrale Eizelle, die sowohl den väterlichen als auch den mütterlichen Vorkern enthält.

Die Eizelle ist von einer Glykoprotein-reichen Zona pellucida bedeckt, die von eng angeordneten Clustern von Kumuluszellen umgeben ist, die in die hyaluronsäurereiche extrazelluläre Matrix eingebettet sind. Behandeln Sie nun die Eier mit dem Enzym Hyaluronidase, das die Hyaluronsäure verdaut. Dadurch werden die Kumuluszellen dissoziiert und schließlich die Zona pellucida freigelegt, die die Eizelle umgibt.

Positionieren Sie eine einzelne behandelte Eizelle in der Nähe der Spitze einer Haltepipette und üben Sie Saugdruck aus, um ihre Position zu fixieren. Nehmen Sie eine Mikroinjektionsnadel mit schmaler Bohrung, die eine gentechnisch hergestellte lentivirale Vektorsuspension enthält, die ein Transgen trägt, das in der Virushülle eingekapselt ist. Diese Retroviren haben die inhärente Fähigkeit, sich in das Wirtsgenom zu integrieren.

Als nächstes stechen Sie die Nadel durch die Zona pell