Von-Kossa-Färbung von glatten Zellen der Aortengefäßmuskulatur: Eine in vitro-Technik zur Beurteilung der Verkalkung der arteriellen Medialschicht

Vaskuläre glatte Muskelzellen (VSMCs) sind die wichtigsten zellulären Bestandteile in der Tunica media - der mittleren Schicht der Blutgefäßwand. Als Reaktion auf pathologische Signale oder Alterung vermitteln diese Zellen die Gefäßverkalkung - ein Phänomen der Kalziumansammlung in der extrazellulären Matrix.

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte, die eine adhärente Schicht aus vorverkalkter, muriner Aorten-VSMC-Kultur enthält. Inkubieren Sie die Zellen mit Formalinlösung, um zelluläre Proteine zu vernetzen und die VSMC-Struktur vor der Färbung zu stabilisieren.

Beginnen Sie mit der Von-Kossa-Färbung, indem Sie Formalin aus der Vertiefung aspirieren und Silbernitratlösung hinzufügen. Inkubieren Sie die Platte unter einer geeigneten Lichtquelle.

Sobald die Silbernitratlösung die Verkalkungsstellen in der extrazellulären Matrix der VSMC-Schicht erreicht, ersetzen die Silberionen die an Phosphat gebundenen Kalziumionen. Dies führt zu einer vorübergehenden gelben Färbung. In Gegenwart von organischer Substanz und Licht führt der photochemische Abbau von Silberphosphat zu einer schwarz gefärbten metallischen Silberbildung.

Entsorgen Sie die maximale Menge der verbrauchten Silbernitratlösung