JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:26 Min. • July 8th, 2025
Mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) sind zirkulatorische Blutzellen mit einzelnen, großen Zellkernen, die aus B- und T-Lymphozyten, natürlichen Killerzellen, Monozyten und dendritischen Zellen bestehen. PBMCs speichern überschüssige Glukose in polymerer Form als Glykogen - ein verzweigtes Polysaccharid - in ihrem Zytoplasma.
Um das Vorhandensein von Glykogen in PBMCs nachzuweisen, erstellen Sie einen einheitlichen Abstrich der isolierten PBMCs auf einem Objektträger. Behandeln Sie die Zellen mit Formalin - einer Fixierlösung, die zelluläre Biomoleküle vernetzt und so die strukturelle Integrität der PBMCs bewahrt.
Tauchen Sie den Objektträger teilweise in Amylaselösung. Dieses Enzym dringt in die Zellen ein und hydrolysiert das Glykogen in den behandelten Zellen. Daraus ergeben sich zwei unterschiedliche Zellpopulationen - enzymbehandelte, glykogendefiziente und nicht Amylase-behandelte, glykogenreiche Zellen.
Überlagern Sie sie mit periodischer saurer Lösung, die die Hydroxylgruppen der Glykogenmoleküle oxidativ in Aldehyde umwandelt.
Spülen Sie den Objektträger mit Wasser ab, um die Oxidationsreaktion zu stoppen und überschüssige periodische Säure zu entfernen. Behan
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