Toluidinblau-Färbung von peripheren Nervenabschnitten: Eine Technik zur Färbung myelinisierter Nervenfasern für die Visualisierung der peripheren Nervenstruktur

Periphere Nerven bestehen aus Axonen, die von Schwann-Zellen umgeben sind, die sich mit mehreren Schichten lipidreicher Zellmembranen um die Axone wickeln und die Myelinscheide bilden.

Um periphere Nerven zu visualisieren, beginnen Sie mit einem Objektträger, der einen festen, in Harz eingebetteten, mit Osmiumtetroxid behandelten peripheren Nervenschnitt der Ratte trägt. In Harz eingebettete Schnitte helfen, die Gewebemorphologie zu erhalten.

Die Behandlung mit Osmiumtetroxid bewirkt die Ablagerung von metallischem Osmium in der Lipidschicht der Myelinscheide an der Gewebestelle.

Pipettieren Sie eine alkalische Lösung von Toluidinblau über den Gewebeschnitt. Trocknen Sie den Objektträger bei einer geeigneten Temperatur. Die alkalischen Bedingungen und die Hitze erleichtern das Eindringen von Toluidinblau durch das Harz in den Gewebeschnitt.

Toluidinblau, ein kationischer Farbstoff, bindet an die negativ geladenen Phosphatgruppen auf der DNA und interkaliert auch zwischen den DNA-Basenpaaren in Schwann-Zellkernen. Darüber hinaus bindet der Farbstoff an RNA im Zytoplasma, außerhalb der Myelinscheide.

Geben Sie eine Eindecklösung über den gefärbten Nervenabschnitt und bedecken Sie ihn