Lipidtröpfchenfärbung von Larven Drosophila-Önozyten: Eine Technik zur Beurteilung der Lipidtröpfchenakkumulation unter normalen und gestressten Bedingungen unter Verwendung von BODIPY-basiertem Farbstoff

Drosophila-Larven sind spezialisierte Zellen, die sich in Form von diskreten Clustern an der basalen Oberfläche der lateralen Epidermis - der oberflächlichen Hautschicht - anheften. Diese Önozyten sind in erster Linie am Fettstoffwechsel beteiligt.

Während des Hungerns sammeln diese Ösozyten überschüssige Lipidtröpfchen an. Jedes Tröpfchen besteht aus einem hydrophoben Kern aus neutralen Lipiden wie Triglyceriden und Cholesterinestern, der von einer Phospholipid-Monoschicht umgeben ist.

Um die Lipidtröpfchen sichtbar zu machen, nehmen Sie einen präparierten Schnitt der Larvenepidermis von Drosophila mit anhaftenden Önozyten. Die Behandlung erfolgt mit einem Fixierungspuffer, der Paraformaldehyd enthält, um die zellulären Proteine wie Proteasen zu vernetzen und die strukturelle Integrität der Önozyten zu erhalten. Entfernen Sie den Fixierpuffer. Inkubieren Sie mit einem fluoreszierenden Farbstoff auf BODIPY-Basis im Dunkeln, um Photobleiche zu vermeiden.

Während der Inkubation diffundiert der unpolare Farbstoff über die Zellmembran der Önozyten und durchquert die Monoschicht, die die Lipidtröpfchen umgibt. Die Hydrophobie der Farbstoffmoleküle ermöglicht es, dass sie in den unpolare