Alizarin-Rot-Färbung: Eine Technik zur Visualisierung der Mineralisierung durch kultivierte Osteoblasten

Osteoblasten sind knochenbildende Zellen, die kleine Vesikel in ihre extrazelluläre Matrix, die EZM, sezernieren. Diese Vesikel, sogenannte Matrixvesikel, sind mit Membrantransportern und Enzymen ausgestattet, die den Eintritt von Kalzium- und Phosphationen ermöglichen und darin Mineralkristalle bilden. Wenn sich Kristalle ansammeln, durchbrechen sie die Vesikelmembran und bilden mineralisierte Knötchen in der EZM, die die Knochenmineraldichte bilden.

Um die Mineralisierung sichtbar zu machen, beginnen Sie mit Osteoblastenzellen auf einem biokompatiblen Gerüst in einem geeigneten Wachstumsmedium. Die Osteoblasten heften sich an das Gerüst und nutzen Wachstumsfaktoren aus dem Medium, um Matrixvesikel zu sezernieren, die anschließend in der EZM mineralisierte Knötchen bilden.

Aspirieren Sie das Kulturmedium und spülen Sie die Zellen, um alle Spuren des Mediums zu entfernen. Behandeln Sie die Zellen mit einer Formalinlösung, die die EZM-Vernetzung, Fixierung und Konservierung der Gewebestruktur induziert. Waschen Sie die Zellen, um restliches Formalin zu entfernen.

Fügen Sie dann Alizarinrot-Färbelösung hinzu und inkubieren Sie die Kultur. Die Farbstoffmoleküle binden an den mineralis