Silberfärbung von sulfatierten Glykosaminoglykanen: Eine Färbemethode zur Visualisierung von sulfatierten Glykosaminoglykanen in Polyacrylamidgelen

Sulfatierte Glykosaminoglykane, GAGs, sind lange, negativ geladene, lineare Polysaccharide mit sich wiederholenden Disaccharid-Einheitsketten, die an unterschiedlichen Positionen sulfatiert sind und in unterschiedlichen Längen vorliegen.

Um isolierte sulfatierte GAGs von Interesse mit unterschiedlicher Kettenlänge in einem Polyacrylamidgel nach der Elektrophorese sichtbar zu machen, nehmen Sie das Gel vorsichtig aus seiner Kassette. Spülen Sie mit entionisiertem Wasser ab und entfernen Sie anhaftende Gelstücke, die die Fleckenbildung beeinträchtigen könnten.

Mit einer sauren Alcianblau-Lösung behandeln. Unter sauren Bedingungen interagiert Alcianblau, ein polyvalenter kationischer Farbstoff mit einem Kupferatom in der Mitte, spezifisch mit negativ geladenen sulfatierten GAGs über ionische Wechselwirkungen und bildet einen tiefblauen wasserunlöslichen Komplex.

Waschen Sie das Gel mit entionisiertem Wasser und Methanol und entfernen Sie alle Fleckenreste. Inkubieren Sie das Gel mit einer alkalischen Silbernitratlösung. Unter alkalischen Bedingungen bieten die Alcian-Blau-gebundenen sulfatierten GAGs Stellen für positiv geladene Silberionen, um zu binden und einen Komplex zu bilden.

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