JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 2:42 Min. • July 8th, 2025
Proteoglykane bestehen aus einem Kernprotein, das kovalent an sulfatierte Glykosaminoglykanketten gebunden ist.
Um Proteoglykane sichtbar zu machen, beginnen Sie mit Gerüsten auf Kollagenbasis - dem porösen polymeren Substrat - und säen Sie die mesenchymale Stammzellsuspension (MSC) darauf aus. Dies gibt den MSCs strukturellen Halt und ermöglicht es ihnen, sowohl an der Oberfläche als auch in den Hohlräumen der Gerüste zu wachsen.
Behandeln Sie die Konstrukte in einem chondrogenen Differenzierungsmedium, das transformierende Wachstumsfaktoren enthält, die die Umwandlung von MSCs in reife Chondrozyten - Knorpelzellen - vorantreiben. Reife Chondrozyten sezernieren Proteoglykane, die mit dem Kollagen im Gerüst ein Netzwerk bilden.
Nehmen Sie einen Schnitt, der aus dem mit Chondrozyten beladenen Konstrukt hergestellt wurde. Fügen Sie eine saure Lösung aus Alcianblau-Fleck hinzu, die mit Guanidiumhydrochlorid ergänzt ist, und inkubieren Sie. Während der Inkubation dissoziiert das Guanidinhydrochlorid in der Farbstofflösung alle Proteoglykanaggregate für eine bessere Färbung.
Anschließend binden die negativ geladenen sulfatierten Glykosaminoglykane aus den Proteoglykanen an die kupferhal
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