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Biologische Techniken
0 Ansichten • 2:49 Min. • July 8th, 2025
Bei der Fibrose handelt es sich um eine vermehrte Ablagerung von fibrillärem Kollagen in der extrazellulären Matrix des geschädigten Gewebes. Strukturell besteht es aus Drei-Helix-Kollagen-Polypeptidketten.
Um Kollagen mit Picrosiriusrot-Farbstoff zu färben, nehmen Sie einen Paraformaldehyd-fixierten, in Paraffin eingebetteten Herzgewebeschnitt. Tauchen Sie den Gewebeabschnitt in Xylol - ein organisches Lösungsmittel - um das umgebende Wachs aufzulösen.
Behandeln Sie das entparaffinisierte Gewebe nacheinander mit abnehmenden Alkoholkonzentrationen, um das Xylol zu ersetzen. Tauchen Sie das Gewebe in Wasser, um es für eine bessere Visualisierung der Flecken in den folgenden Schritten zu rehydrieren.
Tauchen Sie das Gewebe in eine Picrosirius-Rot-Lösung, die Sirius-Rot - einen anionischen Azofarbstoff - und Pikrinsäure enthält.
Sirius Red enthält saure sulfonische Gruppen, die mit den basischen Aminogruppen von Lysin, Hydroxylysin und Arginin interagieren, die im Kollagen vorhanden sind. Die Pikrinsäure trägt zur Aufrechterhaltung des sauren pH-Werts bei und erleichtert die Bindung von Farbstoffmolekülen in paralleler Ausrichtung mit dem Kollagen
.Spülen Sie die Objektträger in einer angesäuerten Entfärbungslösung ab, um überschüssige Flecken zu entfernen. Geben Sie einen Tropfen Eindeckmedium auf den Objektträger und betrachten Sie ihn unter einem Hellfeldmikroskop.
Der kollagenhaltige fibrotische Bereich erscheint im Vergleich zu den nicht-fibrotischen, gelb gefärbten Regionen hellrot.
Nachdem Sie das Herzgewebe fixiert haben, legen Sie es auf ein Gewebetrenngerät, schneiden Sie es in 2 Millimeter dicke Scheiben und legen Sie die Schnitte in eine Einbettkassette.
Nach dem Einbetten von Paraffin und dem zusätzlichen Schneiden gemäß dem Textprotokoll entparaffinisieren Sie die Objektträger, indem Sie sie 30 Minuten lang in einen Tank mit Xylol legen. Rehydrieren Sie dann das Gewebe in einer sequenziell verdünnten Alkoholserie, gefolgt von destilliertem Wasser.
Verwenden Sie anschließend eine geeignete picrosiriusrote Lösung, um die Gewebeabschnitte vollständig zu bedecken, und inkubieren Sie eine Stunde lang. Verwenden Sie dann eine 0,5%ige Essigsäurelösung, um die Objektträger zweimal zu spülen, und spülen Sie die Proben zweimal in absolutem Alkohol aus.
Trocknen Sie die Proben an der Luft und montieren Sie sie in Kunstharz mit einem Deckglas. Verwenden Sie dann sichtbares Licht unter einem Mikroskop mit 200-facher Vergrößerung, um die Objektträger abzubilden.