Heparin-Affinitätschromatographie-basierte Baculovirus-Aufreinigung: Eine Technik zur Isolierung von Baculoviren aus Insektenzellüberständen

Baculoviren - doppelsträngige DNA-Viren - sind von einer Hülle umgeben, die wichtige virale Glykoproteine wie GP64 enthält.

Um Baculoviren aus einem Zellkulturüberstand zu isolieren, der Zelltrümmer und kontaminierende Proteine enthält, stellen Sie eine Heparin-Affinitätschromatographiesäule zusammen, die eine Matrix aus vernetzten Agarosekügelchen enthält. Diese Kügelchen sind an Heparin gekoppelt, ein lineares Polysaccharid mit Sulfatgruppen, die der Heparinkette eine negative Ladung verleihen.

Äquilibrieren Sie die Säule mit einem Waschpuffer mit neutralem pH-Wert und optimaler Ionenstärke, um günstige Bedingungen für maximale Baculovirus- und Heparin-Wechselwirkungen während der Überstandsbeladung zu schaffen. Laden Sie den Baculovirus-haltigen Überstand auf die Säule.

Die basischen Aminosäuren im Baculovirus GP64 erleichtern unspezifische elektrostatische Wechselwirkungen mit dem negativ geladenen Heparin und binden fest an die Säule, im Gegensatz zu Verunreinigungen, die lose binden. Spülen Sie die Säule mit einem Waschpuffer und entfernen Sie ungebundene und lose gebundene kontaminierende Proteine und Ablagerungen.

Führen Sie einen Elutionspuffer mit höherer Ionenstärke als