Kationenaustauschchromatographie: Eine Technik zur Isolierung von rekombinantem Zielprotein aus Insektenzelllysat basierend auf der Nettooberflächenladung
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Biologische Techniken
0 Aufrufe • 3:33 Min. • July 8th, 2025
Die Kationenaustauschchromatographie erleichtert die Proteintrennung von Gemischen auf der Grundlage ihrer Netto-Oberflächenladung.
Für die Isolierung von Zielsignalwandlerproteinen aus Insektenzellproteinlysat erhalten Sie ein dialysiertes Zielproteinlysat, das andere kontaminierende Proteine enthält. Fügen Sie natriumchloridhaltigen Puffer hinzu, um die Lysatviskosität zu verringern und die Proteinlöslichkeit zu verbessern, wodurch ein Verstopfen der chromatographischen Säule während des Laufs verhindert wird.
Darüber hinaus erleichtert der Puffer des pH-Werts unterhalb des isoelektrischen Punktes (pI) des Zielproteins, bei dem das Protein keine Nettoladung hat, die Bindung von überschüssigen Wasserstoffionen an negative Carboxylatgruppen, wodurch das Zielprotein positiv geladen wird.
Die chromatographische Säule mit vernetzten Agarosekügelchen wird zusammengebaut, die an negativ geladene Gruppen gekoppelt sind. Fügen Sie Bindungspuffer hinzu, um die Säule auszugleichen und die Wechselwirkungen zwischen Säule und Protein zu maximieren. Laden Sie das verdünnte Lysat auf die äquilibrierte Säule.
Mehr positiv geladene Zielproteine interagieren und binden fest an die negativ geladene
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