Butyl-abhängige hydrophobe Wechselwirkung Flüssigkeitschromatographie: Eine Technik zur Charakterisierung von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten auf der Grundlage hydrophober Wechselwirkungen

Antikörper-Wirkstoff-Konjugate - ADCs - werden gebildet, indem ein zielspezifischer monoklonaler Antikörper über geeignete Linker an zytotoxische Wirkstoffe gebunden wird. Der stochastische Konjugationsprozess erzeugt ADCs mit unterschiedlicher Anzahl von Wirkstoffeinheiten.

Die ADC-Spezies zeichnen sich durch ihr Wirkstoff-Antikörper-Verhältnis (DAR) aus, das ihre therapeutische Wirksamkeit bestimmt. Die Hydrophobie von ADCs macht sie zu geeigneten Kandidaten für die hydrophobe Interaktionsflüssigkeitschromatographie oder die HIC-basierte Charakterisierung.

Bauen Sie zunächst eine Chromatographiesäule zusammen, die eine stationäre Phase auf Agarosematrixbasis enthält. Die Matrix ist mit Butyleinheiten - den hydrophoben funktionellen Alkylgruppen - vernetzt. Äquilibrieren Sie die Säule mit einem Puffer mit hoher Salzbindung. Laden Sie anschließend die ADC-Lösung in die Spalte.

Salzionen im Puffer verdrängen Wassermoleküle um ADCs herum und legen deren hydrophobe Bereiche frei. Dies ermöglicht es ADCs, über hydrophobe Wechselwirkungen an die Butylliganden zu binden. ADCs mit einer höheren Anzahl gebundener Wirkstoffeinheiten zeigen eine stärkere Interaktion mit der Säule.

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