Blue Native Polyacrylamid-Gelelektrophorese: eine nicht denaturierende Trenntechnik zur Analyse intakter mitochondrialer Atmungskettenkomplexe

Um die fünf mitochondrialen Komplexe der Atmungskette mit intakten Untereinheiten zu analysieren, erhalten Sie mitochondriale Komplexe, die in einem milden, nichtionischen Detergens solubilisiert sind. Mit Puffer mischen, der Coomassie Blue-G, einen anionischen Farbstoff, enthält.

Coomassie ersetzt das Waschmittel und bindet unspezifisch an die Komplexe, wodurch es eine negative Ladung erhält und sie blau färbt. Darüber hinaus verhindert Coomassie, dass sich die Komplexe ansammeln, und hilft, ihre ursprüngliche Struktur und Funktion zu erhalten.

In einem Elektrophorese-Tank wird eine Gelkassette zusammengesetzt, die ein gradientenauflösendes Gel mit abnehmender Porengröße entlang der Länge umfasst, das mit einem großen Porengrößen-Stapelgel überlagert ist. Füllen Sie die Anoden- und Kathodenkammern mit gekühlter Anode und Coomassie-haltigem Kathodenpuffer.

Befüllen Sie die Vertiefungen mit einer Mischung aus Coomassie gebundenem Proteinkomplex. Elektrophorese einleiten.

Die negativ geladenen Proteinkomplexe wandern vom Stapelgel in das gradientenauflösende Gel zur positiv geladenen Anode. Während kleinere Komplexe schnell durch die Poren wandern, werden größere Komplexe durch restr