JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 5:06 Min. • July 8th, 2025
Chemotherapeutika induzieren einzel- und doppelsträngige DNA-Brüche in Krebszellen, was zu DNA-Schäden und Zelltod führt.
Um DNA-Schäden zu quantifizieren, mischen Sie die mit Chemotherapie behandelten Krebszellen mit geschmolzener, niedrigschmelzender Agarose. Pipettieren Sie diese Mischung auf agarosevorbeschichtete Objektträger. Lassen Sie die geschmolzene Agarose verfestigen und betten Sie die Zellen in die poröse Gelmatrix ein.
Mit einem Lysepuffer behandeln, der hohe Konzentrationen an Reinigungsmitteln und Salzen enthält. Detergenzien lösen Zell- und Kernmembranen auf. Darüber hinaus entfernt das hohe Salzgehalt die Histonproteine von der DNA, so dass supergewickelte DNA an die Kernmatrix gebunden bleibt.
In alkalischem Elektrophoresepuffer inkubieren. Das alkalische Milieu führt dazu, dass sich DNA-Supercoils abwickeln und Einzelstrang- und Doppelstrang-DNA-Brüche freilegen.
Legen Sie die Objektträger in eine Elektrophoresepuffer-haltige Gelschale. Elektrophorese einleiten.
Da die DNA negativ geladen ist, wird sie von der positiven Anode angezogen. Die beschädigten DNA-Fragmente wandern aus dem Zellkern heraus und wandern durch die poröse Gelmatrix, wobei sich längere Fragm
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