JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 7:37 Min. • July 8th, 2025
Für die zweidimensionale Gelelektrophorese eines Proteingemisches, das aus homogenisiertem Tumorgewebe gewonnen wurde, mit einem Puffer behandeln, der Chaotrope enthält, einem zwitterionischen Detergens und einem Reduktionsmittel. Chaotrope und Detergenzien denaturieren und lösen die Proteine auf. Reduktionsmittel reduzieren die Disulfidbindungen der Proteine, erzeugen freie Thiolgruppen und entfalten die Proteine für eine optimale Proteinauflösung.
Übertragen Sie die behandelte Proteinmischung in einen immobilisierten pH-Gradienten-Streifenhalter, IPG. Platzieren Sie einen IPG-Streifen mit linearem pH-Gradienten in der Acrylamid-Gel-Matrix. Fügen Sie Mineralöl hinzu, um die Verdunstung der Proteinlösung zu verhindern. Übertragen Sie den Halter in ein isoelektrisches Fokussierungssystem, IEF. Lassen Sie die Proteinlösung den Streifen rehydrieren.
Führen Sie IEF der ersten Dimension durch. Der elektrische Strom bewirkt, dass geladene Proteine durch den pH-Gradienten zu entgegengesetzt geladenen Elektroden wandern und an ihren jeweiligen isoelektrischen Punkten - dem pH-Wert, bei dem die Proteine keine Nettoladung haben, - immobilisieren.
Behandeln Sie den IPG-Streifen nach der IEF m
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