Ringförmige Mikrostrukturierung Zellchiralitätsassay: Eine In-vitro-Technik zur Bestimmung der multizellulären Chiralität basierend auf der Zellausrichtung auf ringförmigen Mikromustern

Um in vitro die Chiralität von Säugetierzellen zu bestimmen - die Links-Rechts-Verzerrung von Zellen, die sich unter beengten Bedingungen in einer Links- oder Rechtsausrichtung ausrichten - beginnen Sie mit speziell angefertigten, goldbeschichteten Objektträgern in einer medienhaltigen Multi-Well-Platte. Die Objektträger bestehen aus Mikromustern ringförmiger Inseln aus zelladhäsionsförderndem Fibronektin, die mit zelladhäsionsresistenten, selbstorganisierten Monoschichten verfüllt sind.

Als nächstes säen Sie ein geeignetes Volumen der Säugetierzellsuspension auf die Objektträger und inkubieren. Die Zellen adsorbieren an die Fibronektin-haltigen Ringmikromuster. Die umgebende selbstorganisierende Monolage verhindert eine unspezifische Zellanheftung außerhalb der Ringgrenzen.

Ersetzen Sie das Medium und entfernen Sie alle nicht angeschlossenen Zellen durch ein neues Medium. Geben Sie ein Aktin-interferierendes Medikament zu einem Satz Objektträger und inkubieren Sie.

Die anhaftenden Zellen vermehren sich, breiten sich aus und nehmen die Form der darunter liegenden Fibronektininseln an, während sie ihre Aktinfasern als Reaktion auf die räumlichen Signale neu organisieren, die die Zel