In-vitro-Mineralisierungsassay: Eine kolorimetrische Methode zur Quantifizierung von Osteoblasten-Kalziumablagerungen auf Knochentransplantatersatz durch Alizarinrot-Färbung und -Extraktion

Während der Knochenregeneration werden Osteoblasten - knochenbildende Zellen - an die Frakturstelle rekrutiert, wo sie sich vermehren und Osteoid - eine kollagene Matrix - absondern. Nach einer Reifezeit mineralisieren die Osteoblasten das Osteoid durch regulierte Ablagerung von Kalzium- und Phosphationen und initiieren so die neue Knochensynthese.

Um den Grad der Osteoblastenmineralisierung in vitro zu quantifizieren, wird eine primäre Osteoblastensuspension in geeigneten Medien erhalten. Die Suspension wird in eine Multi-Well-Platte mit porösen Knochentransplantat-Ersatzscheiben eingesät und inkubiert.

Die Scheiben dienen als Gerüst, das die Zelladhäsion und -proliferation ermöglicht.

Ersetzen Sie verbrauchte Medien durch frische Medien, die osteogene Ergänzungen enthalten. Inkubieren Sie über einen längeren Zeitraum. Die osteogenen Nahrungsergänzungsmittel regen die Osteoblasten an, die kollagene Matrix zu produzieren und anschließend zu mineralisieren.

Nach der Fixierung die mineralisierte Matrix mit Alizarinrot S, ARS, Lösung färben. ARS, ein negativ geladener Farbstoff, bindet an positiv geladene Kalziumionen in der Matrix und bildet einen rot gefärbten Komplex. Überschüssige