Endotoxin Activity Assay: Ein Chemilumineszenz-basierter Bioassay zur Untersuchung der Endotoxinaktivität in Blutproben
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Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:25 Min. • July 8th, 2025
Bei gramnegativen Bakterien sind Lipopolysaccharid-Endotoxine lebenswichtige Bestandteile der bakteriellen Außenmembran.
Strukturell besteht ein Endotoxin aus dem O-Antigen - der äußersten Polysaccharidkette, die über einen zentralen Kern mit Lipid A verbunden ist, einem immunstimulierenden Glykolipid, das für die Endotoxinaktivität entscheidend ist.
Um die Endotoxinaktivität zu untersuchen, nehmen Sie ein Reagenzglas mit einem geeigneten Puffer, der Anti-Lipid-A-Antikörper, Zymosan - ein exogener Neutrophilenaktivator - und Luminol - ein Chemilumineszenzmittel enthält.
Suspendieren Sie ein optimales Volumen einer infizierten Blutprobe, die Endotoxine und Blutzellen, einschließlich Neutrophile, enthält. Inkubieren Sie das Röhrchen unter physiologischen Bedingungen.
Während der Inkubation erkennt der Anti-Lipid-A-Antikörper die Lipid-A-Komponente des Endotoxins und bindet über Antigenbindungsdomänen an diese, was zur Bildung eines Antikörper-Endotoxin-Komplexes führt.
Die FC-Domäne des Endotoxin-gebundenen Antikörpers bindet an den komplementären Rezeptor der Neutrophilen und präsentiert die gebundenen Endotoxine den Neutrophilen. Diese Bindung wirkt als Priming-Stimulus für Neutrop
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