Gel-Gerinnsel-Limulus-Amöbozyten-Lysat-Assay: Eine Methode zum Nachweis von bakteriellem Endotoxin in Nanopartikelformulierungen

Die äußere Membran gramnegativer Bakterien enthält Endotoxine, die als Lipopolysaccharide oder LPS bezeichnet werden. Das LPS hat einen hydrophilen Oligosaccharidanteil und eine hydrophobe Lipid-A-Region.

Im Wirt erkennen LPS-bindende Proteine Endotoxine. Diese Proteine binden dann die Rezeptoren auf zirkulatorischen Immunzellen. Durch diese Bindung werden die Immunzellen aktiviert, die Entzündungsfaktoren freisetzen. Die Überproduktion dieser Faktoren übertreibt die Immunantwort und führt zum Zelltod.

Um Endotoxine mit dem Limulus-Amöbozyten-Lysat- oder LAL-Assay nachzuweisen, nehmen Sie eine Formulierung ein, die Endotoxine enthält, die über ihre hydrophoben Lipid-A-Anteile an die lipophile Oberfläche von Nanopartikeln gebunden sind.

Geben Sie das LAL-Reagenz in das Röhrchen. Bei diesem Reagenz handelt es sich um ein wässriges Lysat, das inaktive Enzyme und Proteine enthält, die aus den Blutzellen der Pfeilschwanzkrebse stammen.

Inkubieren Sie das Röhrchen, um die Bindung von Endotoxinen an das aus Lysat gewonnene inaktive Gerinnungsfaktor-C-Proenzym zu erleichtern und es autokatalytisch zu aktivieren.

Der aktivierte Faktor C spaltet ein anderes Proenzym, Faktor B, und bildet ein