Annexin-V-Bindungsassay: Eine fluoreszenzbasierte Technik zur Identifizierung apoptotischer Erythrozyten durch Phosphatidylserin-Markierung

Bei bestimmten pathologischen Zuständen schrumpfen die Erythrozyten oder roten Blutkörperchen, begleitet von der Translokation des Membranphospholipids - Phosphatidylserin - vom inneren zum äußeren Membransegel, was zum programmierten Zelltod, der Eryptose, führt und eine Makrophagen-vermittelte Zellphagozytose auslöst.

Zur Messung der Ionophor-induzierten Eryptose in isolierten menschlichen Erythrozytenpopulationen mittels Annexin-V-Bindungsassay beginnen Sie mit Erythrozyten, die in einem glukosefreien Puffer suspendiert sind.

Glukosemangel induziert zellulären Stress und aktiviert die zytosolische Proteinkinase C, die anschließend Kalziumkanäle aktiviert und den Einstrom von Kalziumionen verursacht. Darüber hinaus werden Kaliumkanäle aktiviert, was zu Kaliumausfluss und Zellschrumpfung führt.

Fügen Sie als nächstes Kalziumionophor hinzu, das einen stabilen Komplex mit extrazellulären Kalziumionen bildet. Der Komplex erleichtert den zytosolischen Eintritt von Kalziumionen durch die Zellmembran und erhöht die intrazelluläre Kalziumkonzentration weiter. Dies wiederum aktiviert Scramblase - einen bidirektionalen Phospholipidtransporter -, der bei der Translokation von Phosphatidylse