PolyQ Aggregation Assay zur Identifizierung der neuroprotektiven Wirkung einer Substanz in Würmern

Bei einigen neurodegenerativen Erkrankungen besteht das krankheitsassoziierte Protein aus einem expandierten Polyglutamin-Trakt, polyQ, – einer Kette aufeinanderfolgender Glutaminreste – und ist aberrant konform. Die gestörte Konformation destabilisiert die Proteinhomöostase, was zu einer Proteinakkumulation und Bildung toxischer Aggregate führt, was zu neuronaler Dysfunktion und Tod führt.

Um die Schutzfähigkeit einer Testsubstanz bei der Linderung der PolyQ-Aggregations-assoziierten Proteotoxizität zu untersuchen, wird eine Suspension von transgenen Caenorhabditis elegans-Larven erhalten, die fluoreszenzmarkierte polyQ-Proteine in Körperwandmuskelzellen exprimieren.

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit Medien, die mit bakterieller Nahrung ergänzt sind. Geben Sie die Testverbindung in eine Vertiefung. Übertragen Sie die Larven in die Multi-Well-Platte. Versiegeln Sie die Platte, um eine Austrocknung des Mediums und eine mikrobielle Kontamination zu verhindern. Inkubieren Sie, damit die Larven zu erwachsenen Larven heranwachsen können.

Während der Entwicklung, wenn der Fadenwurm altert, sammeln sich polyQ-Proteine nach und nach in den Muskelzellen an und bilden Aggregate.

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