Östrogenrezeptor-Reporter-Aktivitätsassay zum Screening der östrogenen Aktivität von Phytoöstrogen

Östrogene sind Steroidhormone, die als endokrine Signalmoleküle wirken und an nukleäre Rezeptoren binden – Östrogenrezeptoren beta – und Östrogen-beta-Rezeptorkomplexe bilden.

Diese Liganden-Rezeptor-Komplexe dimerisieren und bilden Homodimere im Zytoplasma der Zelle. Das resultierende Homodimer gelangt in den Zellkern, bindet an das Östrogen-Reaktionselement ERE – eine spezifische DNA-Sequenz innerhalb des Promotors des Zielgens – und leitet die Transkription ein.

Um die östrogene Aktivität von Phytoöstrogenen – pflanzlichen Sekundärmetaboliten, die die Östrogenfunktion nachahmen – zu bestimmen, beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die Reporterzellen enthält, die in einem geeigneten Medium suspendiert sind.

Die Reporterzellen werden so verändert, dass sie die Östrogenrezeptoren beta überexprimieren und mit einem Luciferase-Gen transfiziert, das mit dem ERE-Promotor fusioniert ist. Die Probenlösung, die Phytoöstrogene enthält, zugeben und inkubieren.

Während der Inkubation bindet das Phytoöstrogen an die Östrogenrezeptoren, Beta – exprimiert in den Reporterzellen. Sobald sie gebunden sind, dimerisieren sich die Phytoöstrogen-Rezeptor-Komplexe und translozieren in den Zellkern.