Lumineszenz-basierter Assay zur Beurteilung der Neurotoxizität von Testverbindungen auf Neuronen

Das

Auswachsen von Neuriten – wo Neuronen Projektionen entwickeln – ist entscheidend für die neuronale Funktion und Regeneration.

Um die neurotoxischen Wirkungen von Neuritenauswuchs-fördernden Testverbindungen in vitro zu bewerten, wird eine humane neurale Vorläuferzelle, hNPC, in Differenzierungsmedien suspendiert.

Säen Sie die Zellen in Multi-Well-Plattenvertiefungen aus, die mit Poly-L-Lysin und Laminin beschichtet sind, um die Zellanhaftung am Well-Boden zu erleichtern und das Zellwachstum zu unterstützen. Die Bestandteile der Differenzierungsmedien fördern die hNPC-Differenzierung in Neuronen.

Behandeln Sie einen Satz Vertiefungen mit einer Testverbindung, die das Wachstum von Neuriten fördert. Dies interagiert mit den von hNPC abgeleiteten Neuronen und kann das Wachstum von Neuriten induzieren, ohne die zellulären Stoffwechselprozesse und die anschließende Konzentration von Adenosintriphosphat, ATP – der primären zellulären Energiequelle – zu stören.

Fügen Sie das einstufige Reagenz hinzu, das Detergenzien, das Luciferase-Enzym und das Luciferase-Substrat, Luciferin und ATPase-Hemmer zusammen mit Magnesiumionen enthält, und mischen Sie.

Detergenzien stören die Zellmembran, w