JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 8:51 Min. • July 8th, 2025
MicroRNAs, miRNAs, sind kleine, einzelsträngige, nicht-kodierende RNAs. miRNA baut sich in einen Multiproteinkomplex ein und bindet weiter an komplementäre Ziel-mRNA-Sequenzen, um die Genexpression negativ zu regulieren.
Um spezifische miRNA aus der Gesamt-RNA aus Pflanzengeweben nachzuweisen, fügen Sie einen Gel-Loading-Farbstoff hinzu, der Tracking-Farbstoffe und Formamid – ein RNA-Denaturierungsmittel – enthält. Erhitzen Sie die Probe, um die RNA zu denaturieren und die Bildung von Sekundärstrukturen vor der Elektrophorese zu verhindern.
Laden Sie die Probe und die Standard-RNA-Marker in die Vertiefungen eines vormontierten denaturierenden Polyacrylamidgels. Führen Sie eine Elektrophorese durch, die die größenbasierte Trennung von RNA-Fragmenten erleichtert.
Übertragen Sie das Gel auf vornasses Filterpapier auf einer Elektrolöschkassette. Richten Sie eine mit Puffern getränkte Nylon-Blotting-Membran über dem Gel aus. Stapeln Sie dann die vornassen Filterpapiere. Führen Sie Elektroblotting durch.
Der elektrische Strom bewirkt, dass sich die negativ geladene RNA, einschließlich der miRNA, aus dem Gel auf die positiv geladene Nylonmembranoberfläche bewegt. Setzen Sie die Membran ul
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