Graphen-Biosensor-basierte Feldeffekt-Biosensorik zum Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen

Protein-Protein-Wechselwirkungen, PPIs, sind entscheidend für die Regulierung der meisten biologischen Prozesse.

Um PPIs mithilfe von Feldeffekt-Biosensorik zu detektieren, beginnen Sie mit einem Graphen-Feldeffekttransistorchip. Der Chip besteht aus einer Carboxyl-funktionalisierten Graphenoberfläche als halbleitendem Kanal zwischen der Source- und der Drain-Elektrode.

Inkubieren Sie den Chip mit einer frischen Lösung aus Carbodiimid und N-Hydroxysulfosuccinimid, Sulfo-NHS, in einem Zwitterion-Puffer. Dieser Puffer erzeugt einen geeigneten pH-Wert, der es Carbodiimid und Sulfo-NHS ermöglicht, die funktionalisierten Carboxylgruppen des Chips zu aktivieren und aminreaktive Ester zu bilden.

Fügen Sie die Zielproteinlösung hinzu. Die primären Amine reagieren mit den aminreaktiven Estern und immobilisieren die Proteine auf dem Chip durch Amidbindungsbildung. Fügen Sie eine aminhaltige Quenchlösung hinzu, um ungebundene aminreaktive Ester zu blockieren und eine unspezifische Bindung zu verhindern.

Setzen Sie den Chip in das elektronische Lesegerät ein und kalibrieren Sie ihn mit einem Puffer. Das Lesegerät legt eine konstante Spannung zwischen den Elektroden an. Gemessen wird der result