Massenphotometrie zur Untersuchung von Antigen-Antikörper-Wechselwirkungen auf Einzelmolekülebene

Um Antigen-Antikörper-Wechselwirkungen mittels Massenphotometrie nachzuweisen, inkubieren Sie zunächst die gewünschte Konzentration an gereinigten Antigenen und Antikörpern für den erforderlichen Zeitraum, um die Antigen-Antikörper-Bindung zu erleichtern. Basierend auf der Stöchiometrie der Antigenbindung können die Paratopregionen dieser Antikörper eine unterschiedliche Anzahl von angehängten Antigenen aufweisen.

Die Lösung, die die freien Antikörper enthält, wird zusammen mit den Antigen-Antikörper-Komplexen durch eine vormontierte Durchflusskammer einfließen. Befestigen Sie die Kammer auf dem Mikroskoptisch eines Massenphotometers. Richten Sie dann den Laserstrahl durch die Strömungskammer, um eine optimale Bildgebung zu erzielen.

Abhängig von der Anzahl der an jeden Antikörper angehängten Antigene ändert sich die Molekülmasse der Komplexe. Diese Schwankungen in der Masse führen dazu, dass die Komplexe das Licht unterschiedlich streuen.

Komplexe mit höheren Molekülmassen, bei denen zwei Antigene an beide Paratope eines einzigen Antikörpers gebunden sind, streuen mehr Licht im Vergleich zu einzelnen antigenhaltigen Komplexen. Darüber hinaus weisen freie Antikörper die geringste L