β-Laktamase-basierter konduktimetrischer Biosensor-Assay für Protein-Protein-Wechselwirkungen

Um mit dem β-Lactamase-basierten konduktimetrischen Biosensor-Assay zu beginnen, nehmen Sie einen Schallkopfchip mit Arbeits-, Gegen- und Referenzelektroden. Die Arbeitselektrode ist mit einer leitfähigen Polymerbeschichtung versehen, die die Immobilisierung des Zielantigens erleichtert. Den Referenz- und Gegenelektroden fehlt diese Polymerbeschichtung.

Geben Sie eine Lösung, die das Zielantigen enthält, auf den Chip. Ausbrüten. Das Antigen wird über nicht-kovalente Wechselwirkungen auf der Arbeitselektrodenoberfläche immobilisiert. Waschen, um ungebundene Antigene zu entfernen.

Fügen Sie eine Blockierungslösung hinzu. Proteine in der Lösung heften sich an ungebundene Stellen auf der Arbeitselektrode und blockieren diese.

Fügen Sie dem Chip ein bifunktionelles chimäres Protein hinzu, um das immobilisierte Antigen nachzuweisen. Das chimäre Protein besteht aus einem β-Lactamase-Enzym – einem bakteriellen Protein, das für die Antibiotikaresistenz verantwortlich ist. Das Enzym ist mit einem Nanobody fusioniert – der N-terminalen variablen Region von Einzeldomänen-Antikörpern.

Bei der Inkubation bindet der Nanobody des Proteins an das immobilisierte Zielantigen. Waschen, um ungebundene