Biotinylierte zellpenetrierende Peptidsonde zum Nachweis von Protein-Protein-Wechselwirkungen

In Zellen binden Proteine über spezifische Sequenzen in ihrer Struktur an ihre interagierenden Proteine – und modulieren so die Funktion intrazellulärer Proteine.

Um intrazelluläre Proteininteraktionen zu erkennen, nehmen Sie eine adhärente Zellkultur. Saugen Sie das Medium an.

Fügen Sie ein biotinyliertes zellpenetrierendes Peptid, BCPP-Lösung, hinzu und inkubieren Sie.

Jedes BCPP enthält eine Peptidsequenz, die bei der spezifischen Bindung an das intrazelluläre Zielprotein hilft. Das Peptid hat ein zellpenetrierendes Peptid, CPP, am N-Terminus des Peptids und Biotin am C-Terminus für einen einfachen Nachweis.

Während der Inkubation erleichtert die positiv geladene CPP-Region den Eintritt des gebundenen Peptids durch die Zellmembran bis zum Zytoplasma. Das Peptid bindet an seinen intrazellulär interagierenden Proteinpartner und bildet einen BCPP-Zielproteinkomplex.

Fügen Sie einen Puffer hinzu, der Detergenzmoleküle enthält, die die Zellmembran aufreißen und BCPP-Zielproteinkomplexe und andere zelluläre Komponenten freisetzen.

Fügen Sie eine Lösung aus Agarose-bead-gebundenem Avidin hinzu – einem Glykoprotein, das spezifisch an das Biotin in BCPPs bindet. Inkubieren, wodurch die i