pH-Modulationsassay an gestützten Lipiddoppelschichten zum Nachweis von Protein-Phosphoinositid-Wechselwirkungen
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Biologische Techniken
0 Aufrufe • 6:23 Min. • July 8th, 2025
Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat oder PIP2 ist ein geringfügig membrangebundenes phosphoryliertes Phospholipid. Phospholipase C oder PLC mit spezifischen PIP2-Bindungsdomänen bindet an PIP2 und erzeugt sekundäre Botenstoffe, die für mehrere zelluläre Prozesse unerlässlich sind.
Um PLC-PIP2-Wechselwirkungen in vitro nachzuweisen, beginnen Sie mit einem kleinen unilamellären Vesikel, SUV, saurer Suspension, bestehend aus PIP2 und Phospholipidgemisch, von denen eines an einen pH-empfindlichen Fluoreszenzfarbstoff konjugiert ist.
Pipettieren Sie die Lösung in den Einlass- und Verbindungsauslassschlauch eines vormontierten mikrofluidischen Geräts. Übertragen und fixieren Sie das Gerät auf einem Fluoreszenzmikroskoptisch. Durch die Schwerkraft passieren SUVs den Mikrokanalboden, der aus einem hydrophilen Glasdeckglas besteht.
Die SUVs adsorbieren an der Glasoberfläche, wobei der pH-Wert der Lösung die elektrostatische Abstoßung zwischen den beiden reduziert. Die SUVs interagieren mit der Oberfläche, verformen sich und verschmelzen zu großen Vesikel.
Nach kritischer Oberflächenbedeckung reißen die Vesikel spontan auf und bilden eine gestützte Lipiddoppelschicht, SLB. Führen Sie einen
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