Biomembran-Kraftsonde zur Quantifizierung von Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen

Die Wechselwirkung zwischen einem T-Zell-Rezeptor, TCR, und einem antigenen Peptid, das vom MHC oder Haupthistokompatibilitätskomplex auf einer Antigen-präsentierenden Zelle, APC, präsentiert wird, bewirkt, dass die T-Zelle eine mechanische Kraft auf den APC ausübt. Dieses Phänomen ist für die Aktivierung der T-Zellen notwendig.

Um Rezeptor-Liganden-Wechselwirkungen mit einer Biomembran-Kraftsonde (BFP) zu quantifizieren, beginnen Sie mit einer objektträgerbasierten benutzerdefinierten Zellkammer. Legen Sie die Zellkammer unter ein Mikroskop.

Injizieren Sie Suspensionen von biotinylierten gequollenen Erythrozyten, sondieren Sie Glasperlen, die mit peptidgebundenen MHC-Streptavidin-Biotin-Komplexen beschichtet sind, und T-Zellen in die Kammer. Positionieren Sie die Sonde, das Ziel und die mit Pufferpuffern gefüllten Mikropipetten um die Kammer herum.

Aspirieren Sie mit der Sondenpipette eine biotinylierte Erythrozytenfrequenz und positionieren Sie sie in einem leeren Bereich. Aspirieren Sie eine T-Zelle mit der Ziel-Mikropipette und positionieren Sie sie auf der rechten Seite der Erythrozyten. Aspirieren Sie eine Sondenperle mit der Hilfsmikropipette und befestigen Sie sie an der Sp