TIRF-Mikroskopie zur Visualisierung der Kopplungsdynamik von Aktin und Mikrotubuli

Aktinmonomere polymerisieren von Kopf bis Ende zu dünnen Fasern, die als Mikrofilamente bezeichnet werden. In ähnlicher Weise polymerisieren Tubulin-Dimere zu längeren hohlen zylindrischen Mikrotubuli. Diese Zytoskelettkomponenten erhalten die Zellform und erleichtern die Zellmotilität.

Um die Kopplungsdynamik von Aktin und Mikrotubuli durch Totalreflexionsmikroskopie (TIRF) zu visualisieren, wird eine kundenspezifische Bildgebungsanordnung verwendet.

Die Bildgebungseinheit besteht aus zwei Deckgläsern: einem oberen m-PEG-silanbeschichteten Deckglas und einem unteren biotin-PEG-silanbeschichteten Deckglas. Die beiden Deckgläser sind mit doppelseitigem Klebeband in Längsrichtung angeordnet und an beiden Enden zu einem Strömungskanal versiegelt.

Pipettieren Sie BSA in den Strömungskanal, um die Kammer zu entlüften. Fügen Sie Streptavidin-Lösung hinzu und inkubieren Sie. Die Streptavidin-Moleküle binden an die Biotin-Moleküle, die an das PEG-Silan des unteren Deckglases gebunden sind.

Lassen Sie den TIRF-Puffer in den Kanal fließen. Fügen Sie eine Zytoskelett-Mischlösung hinzu, die unmarkierte und grüne Fluorophor-markierte Tubulin-Dimere zusammen mit unmarkierten, Biotin-markierten u