JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Biologische Techniken
0 Aufrufe • 4:47 Min. • July 8th, 2025
Bei mehrfachen Phosphorylierungen in einem Protein werden dem Protein Phosphatgruppen an verschiedenen Positionen hinzugefügt, insbesondere an Serin- und Threoninresten.
Um mehrere Phosphorylierungen in einem Protein zu identifizieren, beginnen Sie mit einem Röhrchen mit phosphorylierten Proteinen, die mit Stickstoff-15 markiert sind, was hilft, Amidwasserstoffe von anderen Wasserstoffatomen im Protein zu unterscheiden.
Fügen Sie eine interne NMR-Referenzverbindung hinzu, um die relativen Resonanzfrequenzen genau zu messen. Gib das Gemisch in ein Kernspinresonanz-Röhrchen (NMR). Setzen Sie den Tubus in eine rotierende Öffnung ein und platzieren Sie ihn in einem NMR-Spektrometer.
Das Vorhandensein von Phosphaten zeigt elektronenentziehende Effekte in den phosphorylierten Serin- und Threoninresten. Infolgedessen scheinen die Amidwasserstoffe der phosphorylierten Reste im Vergleich zu den anderen Amidwasserstoffen mit geringeren Elektronendichten abgeschirmt zu sein.
Amid-Wasserstoffatome mit unterschiedlichen elektronischen Umgebungen erleben differentielle Magnetfelder um Kerne und erreichen so niederenergetische Zustände.
Wenden Sie einen kurzen Hochfrequenzimpuls an, um die Wasser
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