In vitro Erzeugung von plasmozytoiden dendritischen Zellen aus gemeinsamen lymphatischen Vorläuferzellen

Plasmazytoide dendritische Zellen (pDCs) sind Immunzellen, die auf eine Infektion reagieren, indem sie das Zytokin Typ-I-Interferon produzieren.

Um pDCs in vitro zu erzeugen, wird eine Suspension von gewöhnlichen lymphatischen Vorläuferzellen (CLPs) entnommen, die aus dem Knochenmark der Maus isoliert wurden. CLPs können sich in Lymphozyten und dendritische Zellen differenzieren.

Geben Sie die Zellsuspension über eine Schicht von Feeder-Zellen - adhärente Stromazellen -, die mit Gammastrahlen bestrahlt werden, um die Proliferation zu hemmen. Die Feeder-Zellen liefern Zytokine und Zell-Zell-Kontakte, die für die Differenzierung von CLPs erforderlich sind.

Fügen Sie eine angemessene Konzentration des Fms-ähnlichen Tyrosinkinase-3-Liganden oder FL hinzu – ein bivalentes Zytokin, das die pDC-Entwicklung fördert – und inkubieren.

Die CLPs wandern zwischen den Feeder-Zellen und vermehren sich, um Zellgruppen zu bilden, die als Kopfsteinpflasterbereiche bezeichnet werden.

Das FL im Medium bindet an den Flt3-Rezeptor – einen Tyrosinkinase-Rezeptor – auf den CLPs. Die Bindung induziert die Rezeptordimerisierung und die Autophosphorylierung der Tyrosinreste auf der zytoplasmatischen Domäne.