Markierung von murinen T-Helper-Lymphozyten mit radioaktiv markierten monoklonalen Antikörpern

Zur radioaktiven Markierung von murinen T-Helfern, Th-Lymphozyten, die einen T-Zell-Rezeptor (TCR) tragen, der spezifisch für Hühner-Ovalbumin-Peptid ist, wird ein Röhrchen mit radioaktiv markierten monoklonalen Antikörpern, mAbs, mit der gewünschten radioaktiven Aktivität entnommen.

Der mAb besteht aus einem murinen mAb, der spezifisch für den TCR ist, der auf der murinen Th-Lymphozytenmembran exprimiert wird. Ein Chelator konjugiert das mAb und ein Positronen-emittierendes Kupferisotop und bildet einen stabilen Komplex.

Verdünnen Sie die radioaktiv markierten mAbs mit Kochsalzlösung. Als nächstes geben Sie die verdünnten radioaktiv markierten mAbs in eine Multiwell-Platte, die eine Th-Lymphozytensuspension enthält. Kurz inkubieren.

Innerhalb der Kultur binden die radioaktiv markierten mAbs an die TCRs auf den Th-Lymphozytenmembranen. Übertragen Sie die Zellsuspension nach der Inkubation in ein frisches Röhrchen.

Zentrifuge. Der Überstand mit ungebundenen, radioaktiv markierten Antikörpern ist zu verwerfen. Resuspendieren Sie die Th-Lymphozyten in Medium und überführen Sie sie in eine Multiwell-Platte. Inkubieren Sie für eine längere Dauer.

Die radioaktiv markierte mAb-TCR-Bindung