Intrathorakale virale Nano-Injektion zur Untersuchung von Wirt-Virus-Interaktionen bei erwachsenen Fliegen
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 3:52 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie anästhesierte Wildtyp- und Dicer-2-mutierte männliche Drosophila auf einer Injektionsschale unter einem Stereomikroskop. Stellen Sie sicher, dass die Fliegen frei von symbiotischen Bakterien sind, die die Replikation von RNA-Viren unterdrücken.
Impfen Sie die Fliegen intrathorakal mit einem Nanoinjektor, der eine einzelsträngige RNA-Virussuspension mit positivem Sinn enthält.
Das Virus dringt über Rezeptor-vermittelte Endozytose in die Wirtszelle ein und repliziert sich unter Bildung doppelsträngiger intermediärer RNA. Der Wirtsmustererkennungsrezeptor Dicer-2 verarbeitet die virale doppelsträngige RNA zu kleinen interferierenden RNAs, siRNAs.
Die siRNA bindet an den RNA-induzierten Silencing-Komplex RISC, wo ihr komplementärer Strang entfernt wird. Die RISC-geladenen siRNAs binden über komplementäre Basenpaarung an andere virale RNAs, was zu einem Abbau viraler RNA und Gen-Silencing führt.
Die Interaktion zwischen Dicer-2 und viraler RNA aktiviert nachgeschaltete antivirale Signalkaskaden und produziert antivirale Proteine. Diese antiviralen Proteine interagieren mit den Januskinase (JAK) der benachbarten Wirtszellen und initiieren so die Rezeptordimerisierung und die J
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