Analyse von Immunsynapsen zwischen humanen T-Zellen und SEB-beladenen Raji-Zellen mittels bildgebender Durchflusszytometrie

Nehmen Sie Durchflusszytometrie-Röhrchen mit ungeladenen Raji-Zellen und Staphylococcus aureus-Enterotoxin-B- oder SEB-beladenen Raji-Zellen.

Diese SEB-beladenen Raji-Zellen fungieren als Surrogatantigen-präsentierende B-Zellen, die das Superantigen SEB enthalten, das an MHC-Moleküle der Klasse II komplexiert ist.

Inkubieren Sie mit Pan-Leukozyten.

Die T-Zell-Rezeptoren, TCRs auf T-Zellen, binden an die SEBs auf Raji-Zellen, die zusammen mit co-stimulatorischen Signalen eine stabile Zell-Zell-Verbindung, eine Immunsynapse, etablieren, die zur T-Zell-Aktivierung führt.

Dies löst intrazelluläre Signalwege aus, die eine Umlagerung des Aktin-Zytoskeletts verursachen, wobei sich Signalmoleküle und Oberflächenrezeptoren innerhalb der Synapse ansammeln.

Fixieren Sie die Zellen nach der Inkubation, um ihre Zellstrukturen zu erhalten. Permeabilisieren Sie die Zellen, um intrazelluläre Ziele zu erreichen.

Fügen Sie fluorophormarkierte Anti-CD3-Antikörper, Phalloidin und DAPI hinzu, die an CD3 im TCR-Komplex, an Aktinfilamente bzw. DNA binden.

Visualisieren Sie mit einem bildgebenden Durchflusszytometer Fluoreszenzsignale von CD3 und Aktin, um deren Anreicherung an der Synapse in Gegenwart vo