Echtzeit-Bildgebung der Makrophagen-Phagozytose von IgG-opsonisierten roten Blutkörperchen

Nehmen Sie einen Kanalobjektträger mit Mausmakrophagen. Der Kanal ist mit mediengefüllten Reservoirs verbunden und versorgt Makrophagen mit Nährstoffen.

Ersetzen Sie Medien durch medienhaltige, fluoreszenzmarkierte Antikörper, die an spezifische Oberflächenglykoproteine binden und Makrophagen markieren.

Nehmen wir menschliche rote Blutkörperchen, RBCs, mit fluoreszenzmarkierten Zellmembranen. Opsonisieren Erythrozyten mit Maus-IgG-Antikörpern, die spezifisch an das Glykophorin A binden.

Fügen Sie die IgG-opsonisierten Erythrozyten zum Makrophagen-haltigen Objektträger hinzu. Makrophagen-Fc-Rezeptoren binden die Fc-Region von IgGs an Erythrozyten, was zu einer Clusterbildung von Fc-Rezeptoren um die Kontaktfläche führt und die Erythrozyten für die Phagozytose markiert.

Die Bindung löst intrazelluläre Signalwege aus und aktiviert GTPasen. Aktivierte GTPasen treiben die Reorganisation und Polymerisation von Aktinen voran und bilden dünne Membranvorsprünge, die als Filopodien bezeichnet werden.

Darüber hinaus erstrecken sich Filopodien um die Erythrozyten und schließen sie in den sich entwickelnden phagozytischen Becher ein. Die Ränder des Bechers verschmelzen und bilden ein Phagosom,