Ein Assay für bakterielle extrazelluläre Protein-vermittelte Zytotoxizität auf PMNs
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Immunologie
0 Aufrufe • 3:14 Min. • July 8th, 2025
Nimm eine Kultur von Staphylococcus aureus, einem pathogenen Bakterium, das Leukocidin absondert - ein porenbildendes Toxin - bestehend aus monomeren S- und F-Komponenten.
Pelletieren Sie die Zellen und verdünnen Sie den Überstand seriell. Übertragen Sie den Leukocidin-haltigen Überstand in eine Mikrotiterplatte mit polymorphkernigen Leukozyten (PMNs) und inkubieren Sie.
Die S-Komponente bindet an spezifische Transmembranrezeptoren auf PMNs, gefolgt von einer Hetero-Oligomerisierung, bei der die F-Komponente in die Zellmembran eingefügt wird, was zu einer Porenbildung führt.
Die Pore bewirkt eine Abnahme der intrazellulären Kaliumionen und aktiviert das Pyrindomänen-enthaltende 3- oder NLRP3-Protein der NLR-Familie.
NLRP3 bindet an Apoptose-assoziiertes speckartiges Protein, das eine Caspase-Rekrutierungsdomäne (ASC) enthält, die Pro-Caspase-1 rekrutiert und ein Inflammasom bildet.
Die Autoproteolyse wandelt Pro-Caspase-1 in aktive Caspase-1 um und löst so den Zelltod aus.
Ernte die Zellen in definierten Intervallen. Fügen Sie Propidiumiodid oder PI hinzu, das durch beschädigte Membranen in tote Zellen eindringt, um DNA zu binden und Fluoreszenz zu emittieren.
Mit Hilfe der Durchfl
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