Analyse der Basophilenaktivierung in Gegenwart eines Testallergens mittels Durchflusszytometrie

Nehmen Sie Zytometerröhrchen, die ein Färbegemisch aus fluoreszenzmarkierten monoklonalen Antikörpern enthalten, die in einem Stimulationspuffer suspendiert sind.

Abnehmende Konzentrationen des Testallergens werden in mehrere Röhrchen gegeben. Geben Sie Anti-IgE-Antikörper in ein Röhrchen, das als IgE-vermittelte Positivkontrolle dient, und fügen Sie Puffer zu einem anderen Röhrchen für die Negativkontrolle hinzu.

Pipettieren Sie menschliches peripheres Blut in die Röhrchen. Ausbrüten.

Wenn die Person auf das Testallergen sensibilisiert ist, führt diese Exposition dazu, dass das Allergen an die allergenspezifischen IgE-Antikörper bindet, die an Fc-Rezeptoren auf der basophilen Oberfläche gebunden sind.

Allergene vernetzen IgE-gebundene Fc-Rezeptoren, was zu einer Basophilenaktivierung führt.

Basophile werden degranuliert, wobei intrazelluläre Granulate freigesetzt werden, die Entzündungsmediatoren enthalten, wobei die CD63- und CD203c-Moleküle hochreguliert werden.

Fluoreszenzmarkierte monoklonale Antikörper binden an CD63, CD203c bzw. CCR3 auf Basophilen.

Senken Sie die Temperatur, um die basophile Degranulation zu stoppen.

Fügen Sie Puffer hinzu, um die Erythrozyten zu lysieren u