Natürlicher Killerzell-vermittelter Zytotoxizitätsassay Probenvorbereitung für die durchflusszytometrische Analyse
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Immunologie
0 Aufrufe • 2:40 Min. • July 8th, 2025
Beginnen Sie mit einem Zellpellet, das natürliche Killer- oder NK-Zellen und fluoreszenzgefärbte Zielzellen enthält.
Das Pellet in einem geeigneten Medium resuspendieren und inkubieren.
Die NK-Zelle interagiert über Oberflächenadhäsionsproteine und bildet eine immunologische Synapse mit der Zielzelle.
Dadurch wird die NK-Zell-Signalgebung eingeleitet und zytotoxische Granula, die Perforin und Granzyme enthalten, in die Synapse freigesetzt.
Perforin, ein porenbildendes Protein, erzeugt Kanäle in der Membran der Zielzelle, durch die Granzyme in das Zytoplasma gelangen können.
Granzym, eine Serinprotease, interagiert mit intrazellulären Proteinen und aktiviert den apoptotischen Signalweg in der Zielzelle.
Fügen Sie nun den Fluoreszenzfarbstoff Propidiumiodid hinzu.
Der Farbstoff dringt durch die geschädigten Membranen in tote Zellen ein und bindet an die DNA, indem er zwischen ihren Basenpaaren interkaliert.
Folglich exprimieren die toten Zellen doppeltes Fluorochrom, während die lebenden Zellen einfaches Fluorochrom exprimieren.
Die Probe ist bereit für die Durchflusszytometrie, um die NK-Zell-induzierte Zytotoxizität durch Quantifizierung der Anzahl toter und lebender Zielzellen zu
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