Eine in vitro Technik zur Visualisierung der Exozytose von sekretorischen Granula in Mastzellen

0 Aufrufe • 3:34 Min. • July 8th, 2025

Nehmen Sie ein gekammertes Deckglas, das Mastzellen enthält – Immunzellen mit sekretorischen Granulaten oder SGs, die Entzündungsmediatoren enthalten.

Fügen Sie IgE-Antikörper zusammen mit einem pH-empfindlichen Fluoreszenzreporter hinzu und inkubieren Sie.

Die Antikörper binden an Fc-Rezeptoren auf Mastzellen. Die Reporter werden über die Pinozytose internalisiert, und die resultierenden Endosomen fusionieren mit SGs.

Entfernen Sie das Medium. Fügen Sie ein Antigen hinzu, das mehrere IgE-bindende Epitope enthält; Legen Sie den Objektträger unter ein Fluoreszenzmikroskop und wenden Sie die erforderliche Anregungswellenlänge an.

Der saure pH-Wert von SGs löscht die Reporterfluoreszenz.

Das Antigen bindet an IgE-Rezeptorkomplexe auf der Zelloberfläche und vernetzt diese.

Die Antigen-vermittelte Rezeptoraggregation löst die Migration von SGs in Richtung der Plasmamembran aus.

SNARE-Proteine auf dem Plasma und der SG-Membran vermitteln die Membranfusion und die Abgabe von SG-Fracht, die als Exozytose bezeichnet wird.

Der höhere pH-Wert des Mediums bewirkt eine SG-Alkalisierung, wodurch die Reporter wieder fluoreszieren

.

Eingehende SGs verschmelzen mit den membranabgesicherten. Die Alka

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