Beurteilung der immunologischen Synapsentopologie durch Lebendzell-Bildgebung

Nehmen Sie eine Mikroskopschale mit Puffer, die transfizierte, mit Superantigenen behandelte menschliche Endothelzellen enthält, wobei die Superantigene mit MHC-Molekülen der Klasse II komplexiert sind.

Diese künstlichen Antigen-präsentierenden Zellen exprimieren verschiedene fluoreszierende Proteine auf ihren Membranen und im Zytoplasma.

Als nächstes führen Sie T-Lymphozyten ein, die über T-Zell-Rezeptoren mit den Superantigenen auf den Endothelzellen interagieren und eine stabile Zell-Zell-Verbindung, eine immunologische Synapse, bilden.

Dies löst eine Umlagerung des T-Lymphozyten-Zytoskeletts aus, wodurch die Zellausbreitung und die Aktinausdehnung eingeleitet werden, was zur Bildung von Invadosomen-ähnlichen Protrusionen (ILPs) führt, die mit Aktin-, Adhäsions- und Signalmolekülen angereichert sind.

Adhäsionsmoleküle binden spezifische Rezeptoren auf den Endothelzellen und verstärken so die Interaktion.

Die Synapsenbildung aktiviert die T-Lymphozyten-Signalwege, erhöht den intrazellulären Kalziumspiegel und stabilisiert ILPs.

ILPs induzieren eine lokalisierte Membranbiegung in Endothelzellen und bilden transiente Oberflächenringe.

Analysieren Sie unter einem Fluoreszenzmikrosko