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Nehmen Sie Mycobacterium bovis BCG, ein abgeschwächtes Tuberkulose-verursachendes Bakterium, und injizieren Sie es intradermal in eine Maus.
Eine Entzündungsreaktion gegen die Bakterien bildet ein Granulom, das sich aus Bakterien, epithelioiden Makrophagen, konventionellen Makrophagen und Lymphozyten zusammensetzt.
Führen Sie eine Magnetresonanztomographie oder MRT durch. Das Magnetfeld richtet zufällig ausgerichtete Protonen im Gewebe in seine Richtung aus.
Wenden Sie einen Radiofrequenzimpuls senkrecht zum Magnetfeld an. Die Protonen absorbieren Energie aus dem Puls und kippen vom Feld weg.
Wenn der Puls stoppt, geben die Protonen die absorbierte Energie ab, die als freier Induktionszerfall oder FID bezeichnet wird, und richten sich wieder mit dem Feld aus.
Messen Sie das FID-Signal, um ein Bild zu erhalten. Die Zerfallsdauer ist gewebespezifisch, und Bereiche mit einem längeren Zerfall erscheinen heller.
Nehmen Sie superparamagnetische Nanosonden ein, die an Mycobacterium-spezifische polyklonale Antikörper konjugiert sind, und injizieren Sie sie intravenös.
Die Antikörper binden an mehrere Epitope auf den Bakterien und markieren das Granulom.
Die Nanosonden verkürzen den Zerfall benachbarter Protonen, um das Granulom dunkler erscheinen zu lassen, was eine mykobakterielle Infektion bestätigt.
Um Versuchstiere mit M. bovis BCG zu impfen, rekonstituieren Sie zunächst den lyophilisierten Impfstoff oder die Bakterienbrühe in Sautons Medium und verdünnen Sie die rekonstituierte Stammlösung mit Kochsalzlösung. Laden Sie anschließend 100 Mikroliter der Lösung in eine 1-Milliliter-Spritze pro Tier und injizieren Sie das gesamte Bakterienvolumen intradermal in die linke oder rechte dorsale Schulterblatthaut jeder Maus.
Für die In-vivo-Magnetresonanztomographie von lebenden Tieren mit Nanosonden injizierten Tieren werden T2-gewichtete Fast-Spin-Echobilder jedes anästhesierten Versuchstieres aufgenommen, bevor zwei nanomolare SPIO-Tb-Antikörpersonden in 200 Mikrolitern Kochsalzlösung in die Schwanzvene jeder Maus injiziert werden. Nehmen Sie dann unmittelbar nach der Injektion und in den nächsten 30 Minuten alle fünf Minuten ein Bild von den Tieren auf.
Am Ende der Bildgebungssitzung analysieren Sie die Magnetresonanzbilder quantitativ, wobei die Signalintensität als Maß für die definierten interessierenden Regionen an vergleichbaren Stellen eines M. tuberculosis-Granulomzentrums und des an einen granulomatösen Bereich angrenzenden Rückenmuskels verwendet wird. Verwenden Sie dann die Formel, um die relativen Signalverstärkungen zu berechnen, indem Sie die Signalintensitätsmessung vor und null bis drei Stunden nach der Injektion der Kontrastmittel verwenden.