Verwendung von Immun-RNA-Fluoreszenz-In-situ-Hybridisierung zur Visualisierung von SARS-CoV-2
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Immunologie
0 Aufrufe • 2:59 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie fixierte und permeabilisierte Coronavirus-infizierte Vero-Zellen – eine Interferon-defiziente Säugetierzelllinie.
Im Inneren des Wirts liegt virale RNA als subgenomische oder sgRNAs vor, RNA-Moleküle mittlerer Länge, die für spezifische virale Proteine kodieren, die durch Transkription synthetisiert werden.
Fügen Sie Hybridisierungs-Kettenreaktions- oder HCR-Initiatorsonden hinzu.
Die HCR-Sonde bindet an ihre komplementäre Sequenz auf der Ziel-RNA.
Einführung der fluoreszenzmarkierten Oligonukleotid-Hairpin-Sonden H-1 und H-2.
Die Initiatorsonde bindet an ihren komplementären H1-Schwanz, wodurch die Haarnadelstruktur linearisiert wird.
Die exponierte H1-Sequenz bindet an ihren komplementären H2-Schwanz.
Die nachfolgende H2-Sequenz setzt die Bindung an einen H1-Schwanz fort, amplifiziert fluoreszenzmarkierte Sonden um den Zielbereich herum und erzeugt ein robustes Signal.
Fügen Sie geeignete Antikörper hinzu, um das Zytoskelett der Wirtszelle sichtbar zu machen.
Färben Sie die Zellkerne mit DAPI.
Unter einem Fluoreszenzmikroskop zeigen virusinfizierte Zellen eine rote Fluoreszenz im Zytoplasma, die auf das Vorhandensein der Ziel-RNA hinweist.
Nach dem Fixieren und Permeab
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