Ein Assay zum Nachweis der Produktion reaktiver Sauerstoffspezies in Reisgeweben nach Immunauslösung

Nehmen Sie eine Mikroplatte mit gleichmäßigen Scheidensegmenten, die aus Reissetzlingen geschnitten wurden, und Blattscheiben, die aus Reispflanzenblättern gewonnen wurden.

Fügen Sie steriles Wasser hinzu und inkubieren Sie über Nacht, um sich von der Wundbelastung zu erholen.

Fügen Sie ein immunogenes Peptid hinzu, das aus bakteriellen Flagellen gewonnen wird und als pathogen-assoziiertes molekulares Muster oder PAMP fungiert.

Pflanzenzellen an den Schnittkanten binden über Mustererkennungsrezeptoren an die PAMPs.

Die Bindung löst die nachgeschaltete Signalübertragung aus und aktiviert ein Plasmamembran-lokalisiertes Enzym, das als respiratorisches Burst-Oxidase-Homolog oder RBOH bezeichnet wird.

Aktiviertes RBOH produziert reaktive Sauerstoffspezies oder ROS im Apoplasten – dem Interzellularraum. Die erzeugten ROS werden in Wasserstoffperoxid umgewandelt.

Fügen Sie ein Peroxidase-Enzym und ein Chemilumineszenzsubstrat hinzu.

Die Peroxidase verwendet Wasserstoffperoxid, um das Substrat in ein angeregtes Zwischenprodukt umzuwandeln, das Energie als Licht freisetzt und in den Grundzustand zurückkehrt.

Messen Sie die Lumineszenz in beiden Gewebetypen, um einen starken Anstieg unmitte