Messung der Alloreaktivität in einer gemischten Population von T-Zellen

Beginnen Sie mit einer Multi-Well-Platte, die dendritische Zellen der Maus oder DCs enthält, die Alloantigene oder genetische Varianten von Selbstantigenen tragen.

Einführung von Maus-T-Zellen, einschließlich alloreaktiver T-Zellen, die nicht auf Selbstantigene reagieren, während fremde Antigene erkannt werden.

Die alloreaktiven T-Zellen erkennen diese Alloantigene und interagieren mit DCs, wodurch eine Umlagerung des Zytoskeletts, einschließlich der Reorganisation von F-Aktin, ausgelöst wird.

Dies fördert die Interaktion von Rezeptoren auf T-Zellen mit co-stimulatorischen Molekülen auf DCs und bildet eine zelluläre Verbindung – eine immunologische Synapse.

Fixieren Sie die Zellen, übertragen Sie sie in ein Röhrchen und führen Sie einen Cocktail aus Fluorochrom-markierten Antikörpern ein, die spezifisch für T-Zell- und DC-Rezeptoren sind und eine ausgeprägte Fluoreszenz verleihen.

Entfernen Sie ungebundene Antikörper und resuspendieren Sie die Zellen in einem Puffer, der ein Permeabilisierungsmittel enthält, das die Zellen permeabilisiert, und grüne Fluorophor-markierte Proteinmarker, die an F-Aktin binden.

Die Zellen werden zentrifugiert und in einem Puffer mit Kernfarbstoff resus