Ein Peg-Platten-Biofilm-Assay für das Screening antibakterieller Wirkstoffe
JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Immunologie
0 Aufrufe • 6:41 Min. • July 8th, 2025
Nehmen Sie eine Mikrotiterplatte mit einem Deckel mit zylindrischen Stützen oder Stiften, die mit bakteriellen Biofilmen beschichtet sind.
Platzieren Sie den mit Biofilm beschichteten Stiftdeckel auf Mikrotiterplatten-Vertiefungen mit Puffer, um lose anhaftende oder planktonische Bakterien zu eliminieren, wobei der Schwerpunkt auf Biofilm-gebundenen Messungen liegt.
Übertragen Sie den gespülten, mit Biofilm beschichteten Stiftdeckel auf eine Challenge-Platte mit steigenden Konzentrationen des antibakteriellen Prüfmittels. Inkubieren ohne Schütteln.
Abhängig von der Konzentration und dem antibakteriellen Potenzial des Mittels stört es die bakterielle Stoffwechselaktivität und die Integrität des Biofilms.
Setzen Sie den Stiftdeckel nach der Inkubation auf pufferhaltige Plattenvertiefungen, um Planktonbakterien zu entfernen.
Übertragen Sie es in Mikrotiterplattenvertiefungen mit einem Biofilm-Rückgewinnungsmedium, das Resazurin, einen zelldurchlässigen, schwach fluoreszierenden Farbstoff, enthält. Ausbrüten.
In stoffwechselaktiven Bakterien reduzieren Dehydrogenase-Enzyme blau gefärbtes Resazurin in rosafarbenes, fluoreszierendes Resorufin.
Ein Mangel an Resazurin-Umwandlung deutet au
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