Verwendung von DNA-basierten Zugsonden zur Bewertung der von Immunzellen ausgeübten Rezeptorkräfte

Beginnen Sie mit einem funktionalisierten Glasdeckglas mit Polyethylenglykol-verankerten Goldnanopartikeln.

DNA-Haarnadel-Zugsonden hinzufügen, die eine DNA-Haarnadel enthalten, die mit zwei Oligonukleotiden in gegenüberliegenden Armen hybridisiert ist.

Der Ligandenstrang enthält ein Fluorophor und Biotin, während der Ankerstrang einen Quencher und eine Thiolgruppe enthält. Bei diesem Aufbau unterdrückt der Quencher die Fluoreszenz.

Die DNA-Sonden binden an die Goldnanopartikel und verankern sich an dem Glasdeckglas.

Führen Sie Streptavidin ein, das mit den Biotinmolekülen der Ligandenstränge interagiert.

Fügen Sie biotinylierte Liganden hinzu, die an vorgebundene Streptavidin-Moleküle binden.

Überlagern Sie das Deckglas mit CD8-positiven T-Zellen; ihre Rezeptoren interagieren mit immobilisierten Liganden und bilden eine Rezeptor-Liganden-Interaktionsstelle.

Diese Wechselwirkung erzeugt eine Kraft, die die DNA-Haarnadelstruktur entfaltet, das Fluorophor vom Quencher trennt und die Fluoreszenzemission fördert.

Führen Sie nicht-fluoreszierende Locking-Stränge ein, die mit ungefalteten Segmenten der Sonden interagieren, um das Fluoreszenzsignal zu erhalten.

Quantifizieren Sie die Fluo