TIRF-Mikroskopie-basierte Visualisierung der Phagosomenbildung und des Phagosomenverschlusses

Nehmen Sie eine polymerbeschichtete Glasbodenschale, an deren Oberfläche IgG-opsonisierte rote Blutkörperchen oder Erythrozyten haften.

Stellen Sie die Schale auf einen Tisch mit Totalreflexionsfluoreszenzmikroskop und halten Sie ihn auf physiologischer Temperatur.

Fügen Sie Makrophagen hinzu, die fluoreszenzmarkierte zytoplasmatische Peptide enthalten, die an polymerisiertes Aktin binden und so die Visualisierung des Zytoskeletts erleichtern.

Richten Sie während der Bildgebung einen Laserstrahl in einem Winkel, der über dem kritischen Winkel liegt, was zu einer internen Reflexion und zur Erzeugung einer evaneszenten Welle am Kontaktpunkt führt.

Die evaneszenten Wellen beleuchten selektiv die Fluorophore an der Grenzfläche zwischen Glas und Probe und ermöglichen so eine Echtzeit-Visualisierung der Phagozytose.

Makrophagen-Fc-Rezeptoren binden an die IgG-opsonisierte Erythrozyten, was zu einer Rezeptorclusterbildung um die Kontaktfläche führt.

Clustering löst intrazelluläre Signalwege und GTPase-Aktivierung aus, was die Aktinpolymerisation und die Dynamin-Rekrutierung antreibt und Pseudopoden bildet.

Die Pseudopoden erstrecken sich um die Erythrozyten und bilden einen phagozytischen