Ein In-vitro-Assay zur Bewertung des immunmodulatorischen Einflusses von Monozyten auf die Leukozytenproliferation

Nehmen Sie eine Multi-Well-Platte mit adhärenter mesenchymaler Stammzellkultur (MSC).

Fügen Sie mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) hinzu und inkubieren Sie.

MSCs sezernieren den Hepatozyten-Wachstumsfaktor, der Monozyten dazu veranlasst, einen immunmodulatorischen Phänotyp anzunehmen, der Interleukin-10 oder IL-10 produziert.

Den PBMC-haltigen Überstand in ein Röhrchen überführen.

Fügen Sie Antikörper-beschichtete magnetische Kügelchen hinzu, die an den Monozyten-Oberflächenmarker CD14 binden.

Verwenden Sie einen Magnetabscheider, um die CD14+-Monozyten zu isolieren, und geben Sie sie in zunehmender Konzentration in Multi-Well-Plattenvertiefungen.

Einführung von Fluoreszenzfarbstoff-CFSE-markierten Effektor-CD4+ T-Zellen.

Fügen Sie Antikörper-konjugierte Mikrokügelchen hinzu, die spezifisch an die T-Zell-Oberflächenmarker CD3 und CD28 binden und die Zellen aktivieren.

In den Kontrollmonozyten vermehren sich aktivierte T-Zellen, wobei jede Zellteilung die CFSE-Fluoreszenzintensität in den Tochterzellen verringert.

In Co-Kulturen sezernieren MSC-induzierte Monozyten jedoch IL-10 und unterdrücken so die Proliferation von Effektor-T-Zellen.

Mit Hilfe der Durchflusszytome